ESS - DM -Técnicas Laboratoriais em Biopatologia
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- Prevalência de erros pré-analíticos em amostras anatomopatológicas com impacto na segurança do doente - Estudo retrospetivo – Serviço de Anatomia Patologia da Unidade Local de Saúde Cova da Beira (ULS da Cova da Beira), E.P.E.Publication . Fevereiro, Telma Gonçalves; Baylina, PilarAs práticas clínicas, estão mais exigentes e complexas, dada à pertinência da Segurança como dimensão da qualidade em saúde. A Organização Mundial da Saúde refere a necessário de promover a Segurança do Doente para minimizar fatores que contribuam para a ocorrência de eventos adversos e promover a qualidade dos serviços. Apesar de existirem muitos estudos sobre esta temática, não há uma definição universalmente aceite para o erro em Anatomia Patológica, assim, foi considerado pertinente, identificar os erros referentes à fase pré-analítica dentro desta área. Realizou-se um estudo de caso, suportado numa análise descritiva e exploratória, sobre a prevalência de erros em amostras anatomopatológicas na fase pré-analítica tendo como objetivos 1) identificar os erros mais frequentes; 2) elaborar ações corretivas e 3) sugerir sugestões de melhoria. Foi analisado a documentação das Matrizes de Não Conformidades no período 2019-2023, e determinado o serviço onde aplicar a ação corretiva (solicitação da impressão da requisição e da lista de verificação para a sua averiguação mútua). Durante aplicação desta ação, os erros detetados apresentaram um valor de 9,41%. A combinação dos dois documentos reduz a ocorrência de erros e devoluções, no entanto este valor continua acima da percentagem da média de erros Pré-Analíticos (4,72%).
- Decoding immunomodulatory interactions: Exploring the crosstalk between bone marrow-derived mesenchymal steam cells (BM-MSCs) out the bag and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) for potential in-vivo immunosuppresionPublication . Monteiro, Raquel Leão; Lopes, Sérgio Manuel Bernardo Machado; Vieira, Ana Filipa QuintelaAllogenic hematopoietic stem cell transplant (Allo-HSCT) is crucial for hematological diseases, yet chronic complications may arise as donor imune cells start attacking patient tissues. A lab barrier to studying this alloreactivity is the absence of the hematopoietic stem cell (HSC) niche. Here, we employed boné marrow-derived mesenchymal stem cells (BM-MSCs) from discarded collection bags to assess their potential in modulating peripheral blood mononuclear cell (PBMC) proliferation in-vitro and decode occuring interactions to propose mechanisms of in-vivo immunomodulation. Responder PBMCs, labelled with CFSE dye, were co-cultured for 6 days with irradiated stimulator cell in a 2:1 ratio to mimic alloreactivity, with or without BM-MSCs. Flow cytometry tracked BM-MSCs phenotype and PBMC proliferation/ surface marker expression, while resazurin assays monitored metabolic activity over time. CFSE immunofluorescence and phase-contrast images recorded PBMC proliferation interactions. BM-MSCs expanded successfully, maintaining adequate phenotype. Co-cultures exhibited fewer CFSE-stained PBMCs, equating to na 18% reduction in responder cells, with enhanced metabolic activity. Immunophenotyping revealed downregulation of T cell subsets and increased PD-1 expression, suggesting immunosuppressive effects. These findings underscore BM-MSCs’ immunomodulatory potential, offering a celular therapeutic avenue. Repurposing collection bags as a source of BM-MSCs also offers a practical solution, reducing medical waste and enhancing cost efficiency.
- Next-generation sequencing in endometrial cancer diagnosis: benefits and pitfallsPublication . Ferreira, Sara Lopes; Silva, Regina Augusta Alves Pereira da; Pinto, Carla Alexandra CavacoEndometrial cancer (EC) is a heterogeneous gynecological pathology whose classification has evolved significantly, incorporating classical histological charcaterization with a new molecular approach based on data from the TCGA study (The Cancer Genome Atlas Program). The new classification uses a diagnostic algorithim that includes the immunohistochemical study (IHC) of p53 and NMR proteins, along with the detection of mutations in the POLE gene. The aim of this study was to evaluate the benefits and disadvantages of NGS in the diagnosis of EC in a retrospective series of 233 patients with EC. This assessment was conducted by analyzing previously obtained NGS data related to mutations in the exonuclease domain of the POLE gene, as well as the correlation of NGS and IHC data to evaluate changes in the TP53 and MMR genes. NGS data related to germline variants associated with hereditary syndromes were also analyzed. A total of 217 cases showed concordance between NGS and IHC techniques, and additionally in six cases it was possible to identify germline variants in genes associated with hereditary predisposition syndromes. The 233 cases were molecularly classified into: 11% POLE mutated (POLEmut), 24% MMR deficient (dMMR), 31% p53 abnormal (p53abn) and 34% with no specific molecular profile (NSMP). The study demonstrates that NGS, despite being an expensive and time-consuming technique, offers a comprehensive assessment in the diagnosis of EC: it allows the identification of mutations in POLE and other relevant genes, such as TP53 and MMR, directly impacts the prognosis and therapeutic management of patients and, in addition, it is useful to diagnose hereditary syndromes in the patients under study.
- Study of 3-0-Methyldopa quantification for possible integration into the portuguese newborn screening programPublication . Santos, Raquel Alexandra Martins; Rocha, Hugo Daniel Azevedo; Silva, Regina Augusta Alves Pereira daAromatic L-amino acid decarboxylase (AADC) deficiency is a rare genetic disorder that impairs neurotransmitter synthesis, leading to severe neurological and developmental symptoms. Early diagnosis through newborn screening is essential for timely and appropriate treatment. The quantification of 3-0-methyldopa (3-OMD), a metabolite that accumulates in AADC deficiency, in dried blood spot (DBS) samples is a viable and minimally invasive method for detecting this condition. This study assessed the feasibility of integrating 3-OMD quantification into the current protocol used in the Portuguese Newborn Screening Program using flow injection anlysis coupled with tandem mass spectometry (FIA-MS/MS). After the method was implemented and optimized, it was validated in terms of sensivity, specificity, and precision, without interfering with the detection of other biomarkers. For samples with elevated 3-OMD levels, a second-tier test using liquid chromatography-tandem mass spectometry (LC-MS/MS) was developed to resolve potential interferences. Although no cases of AADC deficiency were identified in this cohort, the method consistently quantified 3-OMD, detecting elevated levels in patients undergoing levodopa therapy. These results demonstrate that integrating 3-OMD quantification into the existing newborn screening workflow is feasible, presenting a promising approach for the early detection of AADC deficiency.
- Implementação de rastreio molecular do cancro do colo do útero em Angola - Projeto pilotoPublication . Andrade, Patrícia Isabel Ribeiro; Rocha, Hélder Henrique Ribeiro; Cardoso, Luís Augusto Cirnes; Silva, Regina Augusta Alves Pereira daO cancro cervical é um importante problema de saúde global e uma das principais causas de morte em mulheres de países com baixos rendimentos, sobretudo devido à falta de programas de rastreio eficazes. A infeção persistente pelo papilomavírus humano (HPV) é a principal causa, e os tipos de hrHPV aumentam significativamente o risco de cancro. Este trabalho representa a primeira caracterização da prevalência do HPV e das lesões cervicais em Angola, visando demonstrar o valor de uma estratégia de rastreio que combine a genotipagem do HPV e a dupla marcação p16/Ki-67. 1153 amostras cervicovaginais de mulheres com 25 anos ou mais foram submetidas a genotipagem e diagnóstico citológico, seguido da dupla marcação nos casos positivos. Os resultados demonstraram uma elevada prevalência (18,2%) de HPV de alto risco em Angola. Mais de 55% das mulheres HPV-positivas apresentavam lesões citológicas. A dupla marcação revelou 50,9% de positividade entre as mulheres PAP-positivas/HPV-positivas, sublinhando o valor da triagem para identificar as mulheres de maior risco e melhorar a referenciação para colposcopia. Este estudo apoia a utilização do teste HPV como método de rastreio primário para melhorar a deteção precoce e reduzir a mortalidade, mesmo em locais com poucos recursos, a par de esforços para melhorara acessibilidade a cuidados preventivos.
- Uncovering the role of IL-17 in the pathogenesis of Group B Streptococcus meningitisPublication . Mesquita, Morgana Reis; Andrade, Elva Bonifácio; Silva, ReginaA meningite neonatal por Estreptococos do Grupo B (GBS) continua a ser uma doença associada a uma morbilidade significativa, para a qual são necessárias novas terapêuticas neuroprotetoras. As meninges, enriquecidas com células imunes vitais para uma adequada função neural, permanecem mal compreendidas após o nascimento. Dados não publicados revelaram, utilizando um modelo de murganho que mimetiza transmissão vertical de GBS, que as células T γδ estão alteradas nas meninges de recémnascidos infetados. Neste estudo, investigámos o papel destas células produtoras de IL-17 (células T γδ17 daqui em diante) na fisiopatologia da meningite por GBS e, consequentemente, na homeostasia e ativação da microglia. Utilizando modelos animais de murganho e culturas de microglia in vitro, descobrimos que as células T γδ17 promovem a colonização do cérebro durante a infeção neonatal, alterando a permeabilidade da barreira hematoencefálica. Além disso, sugerimos que a colonização intestinal pode influenciar a resposta das células T γδ meníngeas e que a ausência de células T γδ leva à diminuição da ativação da microglia. Finalmente, demonstrámos que esta infeção ativa a microglia in vitro, sendo a resposta dependente da virulência da estirpe de GBS. Concluindo, a meningite por GBS leva a alterações imunológicas neuromeníngeas que afetam o desenvolvimento cerebral, resultando em sequelas permanentes.
- Correlação entre suspeita clínica e diagnóstico anatomopatológico: importância da análise macroscópicaPublication . Velho, Marta Cristina da Rocha; Gonzalez, Manuel Veiga; Vieira, Ana Filipa QuintelaO diagnóstico microscópico continua a ser o gold-standart para orientar o tratamento e prognóstico em variadas patologias. Contudo, questiona-se a necessidade de exames anatomopatológicos completos em algumas peças cirúrgicas. Este estudo retrospetivo teve como objetivo avaliar a concordância entre diagnósticos clínicos e anatomopatológicos em peças cirúrgicas nomeadamente apêndices ileocecais, pedículos hemorroidários, quistos sacrococcígeos, trompas de Falópio, úteros e vesiculas biliares e determinar se a análise macroscópica é suficiente para um diagnóstico adequado. Adicionalmente foram sinalizados os casos que necessitaram follow-up após o diagnóstico microscópico. A maioria das amostras apresentou uma taxa de concordância superior a 95%. Na macroscopia identificou-se, nos casos de neoplasia mucinosa do apêndice, o lúmen preenchido por muco, a ausência de lesão nos quistos sacrococcígeos e a identificação de miomas e pólipos nos úteros. O diagnóstico anatomopatológico foi crucial em casos neoplásicos de apêndices e vesículas, mesmo sem evidências macroscópicas, assim como nos casos com diagnóstico microscópico de endometriose. Conclui-se que úteros por prolapso, pedículos hemorroidários e quistos sacrococcígeos, são amostras em pode ser realizado apenas exame macroscópico. Este estudo teve como limitações a variabilidade interobservador e a ausência de templates padronizados nas descrições macroscópicas, recomendando-se a implementação destes templates para aprimorar a qualidade do registo macroscópico.
- Reclassificação de variantes: painéis NGS alargados, de pacientes com tumores sólidos, elegíveis para tratamento com PARPIsPublication . Ferraz, Marta Isabel Jesus; Cirnes, Luís; Granja, Sara CostaO desenvolvimento das tecnologias de Sequenciação de Nova Geração (NGS) acelerou a identificação de alterações genéticas em patologias humanas, possibilitando diagnósticos mais precisos e terapias direcionadas. A maioria dos cancros resulta da acumulação de mutações somáticas, estando algumas delas ligadas diretamente a um tipo de tumor, no entanto, diferentes tipos de cancro podem também ter origem na mesma mutação. Assim sendo, a um determinado tipo de cancro que tem origem em diferentes mutações genéticas podem ser aplicadas terapias distintas, e no caso de diferentes tipos de cancro com a mesma mutação pode ser-lhes aplicada a mesma terapia. Este trabalho teve como objetivo identificar e classificar variantes genéticas nos genes BRCA, associadas à deficiência da recombinação homóloga, em 17 pacientes com diferentes neoplasias, visando a identificação de alvos terapêuticos para o tratamento com inibidores da Poli (ADP-ribose) Polimerase (PARPIs). Foi possível a identificação de uma variante patogénica no gene BRCA1 e uma variante provavelmente patogénica BRCA2 em apenas um paciente com neoplasia da próstata em estadio avançado. Este tipo de diagnóstico molecular leva cada vez mais ao aumento da medicina de precisão, um dos avanços mais importantes da biologia.
- Cancro gástrico precoce: da clínica à Anatomia PatológicaPublication . Freitas, Joana Filipa Nunes; Pereira, Fernanda Cristina Rodrigues Malhão; Silva, Regina Augusta Alves Pereira daO cancro gástrico é a quinta neoplasia maligna com maior incidência e mortalidade mundial. O cancro gástrico precoce (CGP) corresponde à fase inicial do adenocarcinoma gástrico estando confinado à mucosa ou submucosa, independentemente da presença de metástases ganglionares. A deteção e tratamento do CGP é essencial para melhorar as taxas de sobrevivência. Este trabalho teve como objetivo realizar uma revisão bibliográfica e compilar as melhores recomendações acerca das técnicas de diagnóstico, tratamento cirúrgico e exame anatomopatológico do CGP. A endoscopia de luz branca é a mais utilizada, devido ao seu custo/benefício, porém a endoscopia de alta ampliação por imagem de banda estreita, apresenta uma maior sensibilidade e especificidade na deteção de CGP. As técnicas de resseção endoscópicas são os métodos utilizados para remoção destas lesões gástricas, sendo minimamente invasivos, com baixo risco de disseminação linfática, proporcionando recuperação rápida e menor morbidade. As gastrectomias são utilizadas apenas quando estas técnicas não são suficientes para a remoção das lesões gástricas. No exame anatomopatológico, é de extrema importância uma correta fixação, marcação de margens e amostragem das amostras, para possibilitar uma correta avaliação das margens cirúrgicas, da profundidade de invasão e invasão de gânglios linfáticos, fundamentais para um correto estadiamento e prognóstico.
- Fusão do gene ALK em CPNPC –deteção por RT-qPCRPublication . Lopes, Jéssica Sofia Gomes; Cardoso, Luís Cirnes; Silva, ReginaO cancro do pulmão é a neoplasia com a maior taxa de mortalidade mundialmente, e aproximadamente 5-7% dos pacientes com carcinoma pulmonar de não pequenas células apresentam rearranjo ou fusão do gene Anaplastic lymphoma kinase (ALK), sendo elegíveis para tratamento com inibidores de tirosina quinase (TKIs). A deteção desta alteração é realizada por técnicas como FISH, IHQ, RT-qPCR e NGS, e a obtenção de resultados fiáveis é crucial para a melhoria do prognóstico destes pacientes. Assim, há uma necessidade crescente da otimização e aplicação de novas metodologias para garantir uma melhor performance dos métodos para a deteção de fusões do gene ALK. Este estudo visa a otimização e validação de uma técnica de RT-qPCR para a deteção de fusões do gene ALK, utilizando primers específicos para as extremidades 5’ e 3’ do gene ALK, e confirmação dos resultados obtidos por comparação aos adquiridos pela técnica NGS, nomeadamente nos casos cujo parceiro da fusão não foi identificado. Com uma taxa de sucesso de 86%, o RT-qPCR apresentou uma sensibilidade e especificidade de 94,7% e 97,1%, respetivamente. Demonstrou elevada concordância com os resultados previamente obtidos, e permitiu a confirmação da presença de fusão em 8 de 15 casos (53%) cujo NGS não identificou o parceiro de fusão. A técnica de RT-qPCR otimizada apresentou elevada taxa de concordância com os resultados da metodologia NGS, podendo ser utilizada como método de deteção da presença de fusão, com potencial benefício nos casos que suscitam dúvida na análise por NGS.