REPOSITÓRIO P.PORTO
Repositório Científico do Politécnico do Porto
Entradas recentes
Diagnóstico molecular por sequenciação de nova geração em neuropediatria
Publication . Abelha, Débora Eira; Alonso, Isabel; Silva, Regina
As perturbações do neurodesenvolvimento são um conjunto de perturbações que comprometem a função neurocognitiva. Entre as manifestações mais prevalentes encontram- se o atraso no desenvolvimento e o défice intelectual, geralmente diagnosticadas durante a infância ou adolescência , com uma prevalência de 1-3% em crianças a nível global. Os testes genéticos são parte do protocolo padrão nos cuidados de várias perturbações do desenvolvimento neurológico e a sua utilização tem sido cada vez mais frequente. Este projeto tem como objetivo o diagnóstico molecular em amostras de sangue total de doentes pediátricos com um quadro clínico de perturbação do desenvolvimento intelectual, utilizando sequenciação de nova geração. Foram analisadas 18 amostras de DNA, através de sequenciação de exoma completo . As variantes identificadas foram validadas por reação em cadeia da polimerase e sequenciação de Sanger. Utilizando um painel de genes para perturbações do desenvolvimento intelectual, foram identificadas variantes em 10 dos 18 casos , correspondendo a um rendimento diagnóstico de 12%. Apenas uma variante patogénica foi identificada, tendo sido também detetados dois casos com múltiplas variantes. No entanto, na maior parte dos casos foram identificadas apenas variantes de significado clínico incerto. Estes resultados refletem a elevada complexidade e heterogeneidade genética das perturbações do neurodesenvolvimento e os desafios associados à classificação e interpretação clínica das variantes.
Caracterização histopatológica de culturas de Organóides de carcinomas do ovário
Publication . Santos, Cláudia Filipa Courela; Ricardo, Sara; Resende, Albina; Silva, Regina Augusta Alves Pereira da
O carcinoma seroso de alto grau do ovário (CSAG) é o subtipo mais comum e agressivo do cancro do ovário, associado a elevada recidiva e resistência à quimioterapia. A ascite maligna (AM), frequente nestes doentes, representa uma fonte útil para desenvolver modelos ex vivo. Este estudo teve como objetivo estabelecer um protocolo de avaliação histopatológica de organoides derivados de pacientes (ODPs), cultivados a partir de células de AMs com CSAG. Numa fase inicial, testaram-se linhas celulares em duas condições tridimensionais de cultura, tendo o polyHEMA revelado melhor desempenho. Seguidamente, processaram-se oito amostras de AMs do IPO do Porto, cultivadas em meio específico, com ou sem suplementação por sobrenadante autólogo. Após 30 dias, os ODPs foram fixados e analisados histológica e imunocitoquímica, avaliando-se biomarcadores de diferenciação (MUC1, MUC16 e MSLN), proliferação (Ki67), apoptose (caspase 3 clivada) e quimiorresistência (ALDH1). Os resultados mostraram manutenção parcial dos marcadores de diferenciação, mas redução da proliferação, aumento da apoptose e diminuição de ALDH1, sugerindo perda de subpopulações resistentes. Conclui-se que, apesar de alterações fenotípicas ao longo da cultura, os ODPs derivados de AMs são modelos viáveis para estudo funcional do CSAG, representando uma ferramenta promissora para investigação translacional e desenvolvimento de estratégias terapêuticas personalizadas.
Extração de DNA em cortes FFPE - Estudo comparativo da extração automática vs extração manual
Publication . Rede, Bárbara Martins Teixeira da; Rocha, Hélder Henrique Ribeiro; Silva, Regina Augusta Alves Pereira da; Pinto, Carla Alexandra Cavaco
A preservação dos tecidos em formol e parafina (FFPE) constitui o padrão-ouro em patologia, permitindo análises histológicas detalhadas. Contudo, este processo compromete a qualidade do DNA, dificultando a sua utilização em técnicas moleculares. Com o advento da patologia molecular, a qualidade do DNA extraído torna-se determinante, reforçando a necessidade de selecionar métodos de extração adequados às exigências de cada aplicação. Assim, este trabalho teve como objetivo realizar uma revisão sistemática da literatura sobre métodos manuais e automatizados de extração de DNA a partir de cortes FFPE e, em paralelo, avaliar a sua aplicabilidade em contexto laboral. Para tal, foram utilizadas amostras FFPE de tumores colorretais, cujo DNA foi extraído por um método manual (coluna de sílica) e automático (separação magnética), avaliando-se o rendimento, a pureza e a integridade do DNA obtido. Os resultados mostraram que a extração manual proporcionou maior quantidade de DNA, embora a integridade se tenha revelado limitada em ambos os métodos. O estudo destacou ainda a influência da desparafinação e das condições de lise na eficiência da extração, sugerindo que adaptações metodológicas podem melhorar a qualidade do DNA. A escolha do método deve considerar a finalidade da análise, o volume de amostras e os recursos laboratoriais disponíveis.
Algoritmo para seleção das plataformas de NGS para a oncologia clínica
Publication . Ribeiro, Angélica Cristina Neto; Cirnes, Luís; Silva, Regina Augusta Alves Pereira da
Com os avanços das tecnologias de sequenciação de nova geração, surgiram plataformas cujas características influenciam a aplicação clínica em oncologia. Até ao momento, não existia nenhum algoritmo capaz de identificar as aplicações clínicas mais adequadas para cada plataforma, tanto em targeted sequencing como em sequenciação do exoma completo. O principal objetivo deste estudo exploratório foi desenvolver um algoritmo que apoie essa seleção. Realizou-se uma pesquisa bibliográfica nas bases PubMed, Web of Science e Scopus, abrangendo artigos originais publicados entre 2019 e 2025. Foram analisados 239 artigos, permitindo determinar parâmetros de desempenho, como profundidade de cobertura, tipo e quantidade de amostra, comprimento de leitura, Phred quality score, limite de deteção, custo por amostra, tempo de resposta, e a capacidade de detetar diferentes variantes genéticas. Observou-se que as plataformas short-read representam mais de 90% dos estudos clínicos, com elevada profundidade de cobertura. A sequenciação do exoma completo foi aplicada em situações especificas, enquanto o targeted sequencing predominou no diagnóstico clínico. As plataformas long-read destacaram-se na deteção de regiões complexas, com utilização clínica limitada. Os resultados permitiram desenvolver um algoritmo que orienta a seleção da plataforma mais adequada para cada contexto clínico, promovendo uma aplicação mais eficiente das plataformas de sequenciação.
Falas português? – A integração de alunos PLNM numa escola do 1.º CEB
Publication . Silva, Laurinda Rita da; Duarte, Pedro
As mudanças ocorridas na sociedade portuguesa nas últimas décadas, colocam às escolas inúmeros desafios, onde a diversidade cultural deve ser vista como fator de coesão e integração.
A integração de alunos estrangeiros com Português Língua Não Materna (PLNM), além de fator de inclusão, é agente preponderante no sucesso educativo dos alunos e na gestão eficiente e assertiva de qualquer organização educativa.
Partindo da opinião de Duarte (2017), “os estudantes surgem, simultaneamente, como membros das organizações escolares e os seus mais imediatos beneficiários”, apresento uma investigação-ação, assente na construção de conhecimentos que me permitiram desenvolver um trabalho de planificação, desenvolvimento e avaliação, que de acordo com o regulamentado no Despacho n.º 2044/2022, garanta o apoio, a integração, a igualdade de oportunidades, o sucesso educativo dos alunos, numa sociedade mais justa e equitativa, que valorize os cidadãos e a cidadania democrática