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- Screening of therapautic compounds in a C. elegans model of Machado-Joseph disease: targeting mitochondriaPublication . Miranda, Vera Adriana Batista; Maciel, Patrícia Espinheira de SáSince the early 90’s a new class of inherited neurodegenerative diseases has been characterized, the polyglutamine (polyQ) expansion diseases. This group is composed by nine progressive and finally fatal disorders. The mutation underlying each one of these disorders is an expansion of a CAG trinucleotide repeat that encodes a polyQ tract in the respective disease proteins. This polyQ expansion causes the appearance of misfolded protein species, which ultimately lead to the formation of aggregates and neuronal loss. Although polyQ diseases present different clinical features and neuronal degeneration pattern, all these diseases have in common the fact that the associated gene products are widely expressed but affect only specific subsets of neurons. This specificity suggests that protein misfolding and its toxic outcomes may be determined by the polyQ-flanking sequences of the specific disease-associated proteins. Machado-Joseph disease (MJD) or spinocerebellar ataxia type 3 (SCA3) is the most frequent autosomal dominant ataxia worldwide. Ataxin-3 (ATXN3) is a polyQ protein and expansion of its repetitive glutamine tract causes MJD. The economic and social impact of these neurodegenerative diseases has led several researchers worldwide to investigate the pathogenesis mechanism and therapeutic strategies for polyQ diseases. Animal models, like Caenorhabditis elegans (C. elegans), have proved to be an essential tool in this field due to their importance in the development of therapeutic trials. C. elegans offers unique advantages for examining the aggregation dynamics of aggregation-prone proteins and its toxic effects on individual neurons, since the transparency of all 959 cells allows easy detection of fluorescent proteins in live animals. Despite having relatively few neurons, C. elegans display a wide array of complex behaviors and a clear link exists between the behavior and the function of neuronal subsets. In this work, we used a C. elegans model of MJD for a screening of therapeutic compounds. First, we have tested the effect of a candidate compound targeting mitochondrial toxicity: creatine (Cr). We showed that, in our C. elegans model of MJD pathogenesis, Cr food supplementation had limited effect in mutant ATXN3-mediated neuronal dysfunction and aggregation. Further experiments will be required to determine Screening of therapeutic compounds in a C. elegans model of Machado-Joseph disease: targeting mitochondria. viii the treatment effectiveness. Next, in a hypothesis-free approach, we have tested 20 compounds from an FDA-approved out-of-patent library, and the small molecules Prestw 38 and Prestw-227 significantly reduced mutant ATXN3-mediated motor impairment. In summary, with this work we have identified two compounds that reduced the percentage of mutant ATXN3 animals that present locomotion defects, and one of which showed a significant reduction in the number of aggregates per area and in the area of aggregates per area. It also made available a valuable C. elegans model/tool for drug discovery and target identification that can be very useful in future therapy development in MJD.
- Estudo da evolução do estado clínico de mulheres com amostras de citologia ginecológica negativa e teste para HPV de alto risco positivoPublication . Alves, Daniela Sofia CarvalhoEm Portugal, o segundo cancro mais frequente nas mulheres é o cancro do colo do útero, representando cerca de 6% de todos os cancros nas mulheres. O vírus papiloma humano, Human papillomavirus (HPV) que está presente em cerca de 90% das lesões de alto grau e cancro cervical, sendo dividido em dois grupos: o HPV de alto risco que está associado a lesões de alto grau e cancro do colo do útero e o HPV de baixo risco que raramente causa lesão. Neste trabalho visamos estabelecer se houve evolução para lesão nos casos de pacientes com citologia normal e tipagem para HPV de alto risco positiva. Estudaram-se 51 pacientes do Hospital Pedro Hispano, dividido em dois grandes grupos, um com mulheres até aos 35 anos, outro com mulheres com mais de 35 anos, com resultado da citologia ginecológica normal, e uma tipagem para HPV de alto risco positiva. Das 51 mulheres, 72,6% fizeram segunda colheita e destas 54.9% não fizeram tipagem de HPV de alto risco. Para avaliação dos resultados foram usados os testes de estatística descritiva, nomeadamente os de frequência. Das 23 segundas colheitas foi extraído ADN e foi analisado num equipamento específico para detectar a presença de HPV de alto risco. Das amostras testadas verificou-se que 37,8 % das mulheres continuaram positivas para HPV de alto risco e destas 8,7% evoluiu para uma lesão de alto grau. Apesar de haver uma percentagem razoável de evolução para lesão nestes casos, o número da amostra é reduzido, pelo que condiciona a extrapolação para a população. Além disso o tempo de follow-up é relativamente curto, e seria interessante seguir estas mulheres por um período mais longo para confirmar esta tendência. Fazer a quantificação dos oncogenes E6/E7, traria talvez resultados mais consistentes uma vez que se poderia verificar se o ADN do vírus já se encontrava integrado no genoma da mulher.
- Contributos para o desenvolvimento de fagoterapias para infecções hospitalares por Pseudomonas aeruginosa multirresistentesPublication . Reis, Ana Cristina Pereira Alves dos; Fernandes, Rúben; Machado, Pilar Baylina; Ferraz, RicardoAs infecções hospitalares podem ser evitadas pelo controlo de determinados factores inerentes aos profissionais, material, ambiente. Neste momento, existe legislação própria de forma a regulamentar procedimentos que evitam a propagação da infecção e/ou dos agentes que a causam. A Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa oportunista responsável por grande parte das infecções hospitalares. Pelo facto de ser oportunista é mais frequente em pacientes imunocomprometidos, sujeitos a transplantes, intervenções cirúrgicas, entre outros. Em suma, esta tese contribui para a compreensão da biologia da P. aeruginosa, tratamento antibacteriano e sua resistência, bem como compreender a influência do estado metabólico dos indivíduos na infecção. Este estudo teve como objectivo compreender os factores de resistência manifestados pela P.aeruginosa no sentido de desenvolver alternativas terapêuticas para este agente. Numa primeira fase foram caracterizados 72 isolados hospitalares de P. aeruginosa e 91,67% manifestou resistência a mais do que 3 classes de Antimicrobianos.
- Seasonal dynamics of microcystis spp. and their toxigenicity as assessed by qPCR in a temperate reservoirPublication . Martins, António; Moreira, Cristiana; Vale, Micaela; Freitas, Marisa; Regueiras, Ana; Antunes, Agostinho; Vasconcelos, VítorBlooms of toxic cyanobacteria are becoming increasingly frequent, mainly due to water quality degradation. This work applied qPCR as a tool for early warning of microcystin(MC)-producer cyanobacteria and risk assessment of water supplies. Specific marker genes for cyanobacteria, Microcystis and MC-producing Microcystis, were quantified to determine the genotypic composition of the natural Microcystis population. Correlations between limnological parameters, pH, water temperature, dissolved oxygen and conductivity and MC concentrations as well as Microcystis abundance were assessed. A negative significant correlation was observed between toxic (with mcy genes) to non-toxic (without mcy genes) genotypes ratio and the overall Microcystis density. The highest proportions of toxic Microcystis genotypes were found 4-6 weeks before and 8-10 weeks after the peak of the bloom, with the lowest being observed at its peak. These results suggest positive selection of non-toxic genotypes under favorable environmental growth conditions. Significant positive correlations could be found between quantity of toxic genotypes and MC concentration, suggesting that the method applied can be useful to predict potential MC toxicity risk. No significant correlation was found between the limnological parameters measured and MC concentrations or toxic genotypes proportions indicating that other abiotic and biotic factors should be governing MC production and toxic genotypes dynamics. The qPCR method here applied is useful to rapidly estimate the potential toxicity of environmental samples and so, it may contribute to the more efficient management of water use in eutrophic systems.
- Prevalência de ESBLs e AmpCs em isolados clínicos de Escherichia coli na região da Serra da EstrelaPublication . Oliveira, Cátia Alexandra Ferrão; Tomaz, Cândida; Fernandes, RúbenA disseminação emergente de estirpes multirresistentes mediadas por plasmídeo, como Escherichia coli produtora de β-lactamases de amplo espectro (ESBLs e AmpCs), é actualmente uma preocupação mundial. De forma a erradicar estas estirpes, diversos estudos se têm debruçado sobre os seus mecanismos de resistência, epidemiologia, prevalência de variantes e distribuição populacional (hospitalar e comunitária). No entanto, devido à disseminação emergente destas estirpes, bem como ao desenvolvimento de múltiplas variantes, esta problemática permanece por encerrar. Deste modo, o presente estudo apresentou como principais objectivos: determinar a prevalência de genes de β-lactamases, (bla), de amplo espectro do tipo ESBL e AmpC em isolados clínicos de E. coli na região da Serra da Estrela; evidenciar fenómenos de co-produção (frequência e predominância); comparar perfis de susceptibilidade aos antimicrobianos entre diferentes genótipos; e comparar a distribuição de genes bla associados a enzimas de elevado espectro de acção em populações distintas (hospitalar e comunitárias), bem como o género, idade e espécime biológico. No presente estudo foram incluídas 38 estirpes de E. coli com resistência/baixa susceptibilidade às cefalosporinas de terceira geração e susceptíveis à inibição pelo ácido clavulânico. Verificou-se que 97% (37/38) das estirpes pertenciam à população hospitalar, sendo que 79% (30/38) destes indivíduos apresentavam uma idade superior a 75 anos, frequências de géneros equiparadas e 68% (26/38) das estirpes foram isoladas a partir de urinas. A análise molecular permitiu detectar 49 genes bla, em que 55% (27/49) foram identificados como blaOXA-1-like, 33% (16/49) como blaCTX-M grupo 1, 10% (5/49) como blaTEM e 2% (1/49) foram identificados como genes blaCIT. Em aproximadamente 40% (15/38) das estirpes apenas foram detectados genes blaOXA-1-like. Foi observada a co-produção de diferentes β-lactamases em 40% (15/38) das estirpes, sendo a co-produção de CTX-M grupo 1 e OXA-1-like apontada como a mais frequente. O presente estudo permitiu evidenciar a prevalência de genes blaOXA-1-like nesta região de Portugal, divergindo de estudos anteriores. Deste modo, são necessários estudos futuros, mais aprofundados, no sentido de perceber se este acontecimento teve por base uma nova mudança epidemiológica ou um fenómeno endémico desta região.
- Isolamento e cultura de células do tecido cavernoso humano: carcterizaçã fenotípica e identificação de purinoceptores por imunoflurescênciaPublication . Leite, Carla Alexandra Araújo; Correia-de-Sá, PauloA adenosina é um nucleosídeo ubíquo responsável pela regulação da actividade celular através da activação de receptores existentes na membrana das células. A activação de alguns destes receptores intervém na regulação do tónus vascular do tecido cavernoso animal e humano. Estudos anteriores mostraram que os receptores da adenosina dos subtipos A2A e A2B, supostamente localizados no músculo liso e no endotélio vascular do tecido cavernoso humano, respectivamente, estão alterados do ponto de vista funcional em casos de disfunção eréctil vasculogénica (DEV). A DEV está associada a factores de risco, como a Diabetes mellitus do tipo 2, a hipertensão arterial, a hipercolesterolemia e hábitos tabágicos; estes factores estão também associados a alterações marcadas da função endotelial e, consequentemente, a um risco aumentado de doenças cardiovasculares. Sendo a adenosina um potente regulador do tónus vascular, admite-se que a sua participação seja fundamental na regulação da erecção peniana. É, assim, possível supor que a perda do efeito tónico de relaxamento nos vasos penianos da adenosina possa estar na origem da DEV. Para melhor caracterizar o papel da adenosina no controlo da erecção peniana, este estudo procurou estabelecer um protocolo apropriado para o isolamento de células musculares lisas e endoteliais a partir de amostras de tecido cavernoso humano e de rato usando a técnica de explante e a de dissociação enzimática. A caracterização fenotípica das células foi realizada por imunofluorescência indirecta. Esta técnica também foi usada para identificar a presença de receptores purinérgicos nas células isoladas em cultura. Comparativamente com a técnica de explante, a dissociação enzimática das células revelou-se mais eficaz para o isolamento e cultura das células do tecido cavernoso. Esta técnica apresentou um maior rendimento celular, gerando culturas com um elevado número de células viáveis e com um fenótipo bem definido num menor intervalo de tempo. Neste estudo confirmou-se a suspeita fundamentada por ensaios funcionais de que as células musculares lisas do tecido cavernoso humano expressam receptores da adenosina do subtipo A2A. Esta marcação co-localiza com o marcador fenotípico de fibras musculares lisas, α-actina muscular lisa, exibindo um padrão de fluorescência característico. Os resultados preliminares obtidos neste estudo permitem encarar com optimismo ensaios futuros destinados à caracterização de receptores e de enzimas envolvidas na sinalização purinérgica no tecido cavernoso humano e, até, iniciar estudos funcionais em célula única (e.g. “single-cell calcium imaging”) para avaliar possíveis alterações funcionais com significado terapêutico em doentes portadores de DEV resistente a fármacos.
- Reference curves for BMI, waist circumference and waist-to-height ratio for Azorean adolescents (Portugal)Publication . Santos, Rute; Moreira, Carla; Ruiz, Jonatan R.; Vale, Susana; Soares-Miranda, Luisa; Moreira, Pedro; Lopes, Luis; Marques, Ana I.; Oliveira-Tavares, Antonio; Santos, Paula Clara; Abreu, Sandra; Coelho-Silva, Manuel J.; Mota, JorgeThere are no percentile curves for BMI, waist circumference (WC) or waist-to-height ratio (WHtR) available for Portuguese children and adolescents. The purpose of the present study was to develop age- and sex-specific BMI, WC and WHtR percentile curves for a representative sample of adolescents living in the Portuguese islands of Azores, one of the poorest regions of Europe, and to compare them with those from other countries. : Cross-sectional school-based study. Weight, height and WC were objec tively measured according to standard procedures. Smoothed percentile curves were estimated using Cole’s LMS method. Azores, Portugal. Proportionate stratified random sample of 1500 adolescents, aged 15–18 years. Results showed some sex differences in the shape of the BMI curves: in girls, the upper percentile values tend to decrease by the age of 16 and 17 years; whereas in boys, the upper percentiles tend to be flat between 15 and 16 years and then increase until the age of 18 years. In both sexes, the upper percentile values of both WC and WHtR decreased slightly by the age of 16 years and then increased steeply. In both sexes, the Azorean values for the 50th and 90th WC percentiles were higher than those reported for adolescents from the majority of other countries. The reference curves presented herein provide baseline data for the long-term surveillance of Azorean adolescents, as well as for national and international comparisons.
- Evaluation of physical activity programmes for the elderly - exploring the lessons from other sectors and examining the general characteristics of the programmes.Publication . Marques, Ana I.; Soares, Pedro; Soares-Miranda, Luísa; Moreira, Carla; Oliveira-Tavares, António; Santos, Paula Clara; Vale, Susana; Santos, Rute; Carvalho, JoanaIn Portugal, there are several physical activity (PA) programmes for elderly people developed by the local government. The importance of these programmes has been increasing since the evidence has shown that this type of health promotion interventions may reduce the deleterious effects of the ageing process. However, no study has already identified the general characteristics of these programmes nor if they use any scheme to assess the quality of the service provided. A widely-used scheme is the EFQM Excellence Model, which will be in the core of our present work. Thus, the main aims of this preliminary study were 1) to identify the general characteristics of the PA programmes developed by the Portuguese Local Public Administration 2) to determine the extent of implementation of quality initiatives in these programmes. Data were collected by an on-line questionnaire sent to all Continental Municipalities (n = 278). Categorical data were expressed as absolute counts and percentages. Continuous data were expressed as the mean and SD. An open-ended question was analysed using qualitative content analysis with QSR NVivo software. Associations between categorical variables were tested by the use of contingency tables and the calculation of chi-square tests. Significance level was set at p ≤ 0.05. Results showed: i) a total of 125 PA programmes were identified in the 18 districts of the Portugal mainland; ii) the main goal of the majority (95.2%) was the participants' health promotion; iii) different characteristics of the programmes were found according to different regions of the country; iv) certain characteristics of the programmes were associated to the existence of other features; v) only one PA programme developed quality initiatives. In conclusion, although there are many PA programmes for elderly people spread throughout the country, aiming at improving the health of participants, the overwhelming majority does not adopt quality control initiatives. Considering that the quality of a service increases customer satisfaction, the continuous quality improvement of the PA programmes for elderly people should therefore be implemented since they can be useful and critical for elderly satisfaction and adherence.