Percorrer por autor "Salta, S."
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- Acetyl-L-Carnitine prevents methamphetamine-induced structural damage on endothelial cells via ILK-related MMP-9 activityPublication . Summavielle, Teresa; Fernandes, S.; Salta, S.; Bravo, J.; Silva, A.P.Methamphetamine (METH) is a potent psychostimulant highly used worldwide. Recent studies evidenced the involvement of METH in the breakdown of the blood-brain-barrier (BBB) integrity leading to compromised function. The involvement of the matrix metalloproteinases (MMPs) in the degradation of the neurovascular matrix components and tight junctions (TJs) is one of the most recent findings in METH-induced toxicity. As BBB dysfunction is a pathological feature of many neurological conditions, unveiling new protective agents in this field is of major relevance. Acetyl- L-carnitine (ALC) has been described to protect the BBB function in different paradigms, but the mechanisms underlying its action remain mostly unknown. Here, the immortalized bEnd.3 cell line was used to evaluate the neuroprotective features of ALC in METH-induced damage. Cells were exposed to ranging concentrations of METH, and the protective effect of ALC 1 mM was assessed 24 h after treatment. F-actin rearrangement, TJ expression and distribution, and MMPs activity were evaluated. Integrin-linked kinase (ILK) knockdown cells were used to assess role of ALC in ILK mediated METH-triggered MMPs’ activity. Our results show that METH led to disruption of the actin filaments concomitant with claudin-5 translocation to the cytoplasm. These events were mediated by MMP-9 activation in association with ILK overexpression. Pretreatment with ALC prevented METH-induced activation of MMP-9, preserving claudin-5 location and the structural arrangement of the actin filaments. The present results support the potential of ALC in preserving BBB integrity, highlighting ILK as a new target for the ALC therapeutic use.
- Comparação e otimização de métodos de extração de DNA de células cervicais colhidas em ThinPrep® PreservCyt™Publication . Silva, Andreia; Salta, S.; Henrique, R.; Jerónimo, C.O cancro do colo do útero é o nono cancro mais incidente nas mulheres em Portugal. O rastreio desta neoplasia tem evoluído desde a citologia convencional até à deteção do Vírus do Papiloma Humano em colpocitologia cervico-vaginal em meio líquido. Atualmente, novos marcadores biomoleculares, como alterações na metilação do ácido desoxirribonucleico (DNA), têm sido estudados como meio de triagem de mulheres infetadas pelo Vírus do Papiloma Humano. O objetivo deste estudo foi otimizar e comparar três métodos de extração de DNA para análise da metilação. Extraiu-se DNA de dezasseis amostras de colpocitologia, colhidas em ThinPrep® PreservCyt™, através do método fenol-clorofórmio e dos kits QIAamp® MinElute™ Media (QIAGEN, Hilden) e Blood DNA Isolation Mini Kit(Norgen Biotek, Ontario). Após quantificação, o DNA foi modificado por bissulfito de sódio e amplificado por Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa de Metilação Específica para o gene β-Actina. Os valores médios de Cycle threshold (Ct) foram avaliados.O método fenol-clorofórmio teve maior input, e consequentemente conferiu maior quantidade de DNA. Com 15mL de amostra obteve-se 13500ng pelo método fenol-clorofórmio enquanto com 2mL de amostra se obteve 8940ng do kit QIAamp® MinElute™ Media e 927ng do Blood DNA Isolation Mini Kit. Contudo, os kits apresentaram maior eficácia de extração, bem como maior rapidez e facilidade de execução. Não se verificaram diferenças significativas entre os valores médios de Ct de cada método de extração nem entre amostrasarmazenadas durante dez ou catorze meses. Concluindo, os três métodos permitiram obter DNA para amplificação mas a otimização dos kits de extração revelou-se ser a opção mais vantajosa.