Browsing by Author "Meireles, Diana"
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- Caracterização molecular da resistência a antimicrobianos em Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro alargado isoladas em cães e estudo da partilha de clones bacterianos entre animais de companhia e coabitantes humanosPublication . Meireles, Diana; Costa, Paulo; Fernandes, RúbenA pressão seletiva originada pelo uso excessivo de antimicrobianos na medicina humana e veterinária tem contribuído para a emergência de estirpes bacterianas multirresistentes, sendo os estudos mais escassos relativamente à sua presença nos animais de companhia. Porque os animais e os seus proprietários partilham o mesmo espaço habitacional, apresentando comportamentos de contacto próximo, existe uma hipótese elevada de transferência microbiana inter-espécie. Ante esta possibilidade é importante escrutinar o papel dos animais de companhia enquanto reservatórios de estirpes e de genes de resistência, bem como a sua envolvência na disseminação de estirpes bacterianas multirresistentes. Importa também, investigar o papel das superfícies e objetos domésticos partilhados por ambos, como potenciadores deste fenómeno. O objetivo deste trabalho foi, identificar o filogrupo e fazer a caracterização molecular dos genes que conferem resistência aos β-lactâmicos e às quinolonas, em quarenta isolados de Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro alargado (ESBL), obtidas em zaragatoas fecais de cães consultados no Hospital Veterinário do ICBAS-UP. Complementarmente pretendeu-se inferir sobre a partilha de clones de Escherichia coli e Enterococcus spp. com elevadas resistências, em cinco agregados familiares (humanos e seus animais de companhia) assim como avaliar a potencial disseminação de estirpes multirresistentes no ambiente doméstico. Previamente foram recolhidas zaragatoas de fezes, pelo e mucosa oral dos animais e em alguns casos, dos seus proprietários, e ainda do ambiente doméstico. As zaragatoas foram processadas e as estirpes isoladas com base em meios seletivos. Foram realizados testes de suscetibilidade antimicrobiana de modo a estabelecer o fenótipo de resistência de cada isolado. O DNA foi extraído por varias metodologias e técnicas de PCR foram utilizadas para caracterização de filogrupos (Escherichia coli) e identificação da espécie (Enterococcus spp.). A avaliação da proximidade filogenética entre isolados foi efetuada por ERIC PCR e PFGE. No conjunto de quarenta isolados produtores de ESBL e/ou resistentes a quinolonas verificou-se que 47,5% pertenciam ao filogrupo A, havendo uma menor prevalência do filogrupo D (25,0%), B1 (17,5%), e B2 (10,0%).A frequência de resistência nestes isolados é factualmente elevada, sendo reveladora de uma elevada pressão seletiva. Com exceção de dois isolados, os fenótipos foram justificados pela presença de β-lactamases. A frequência da presença de genes foi: 47% blaTEM, 34% blaSHV, 24% blaOXA , 18% blaCTX-M-15, 8% blaCTX-M-2, 3% blaCTX-M-9. Nos isolados resistentes às quinolonas verificou-se maioritariamente a presença de mutações nos genes cromossomais gyrA e parC, e em alguns casos a presença de um determinante de resistência mediado por plasmídeo – qnrS. Nos cinco “agregados familiares” (humanos e animais) estudados foi observada uma partilha frequente de clones de E. coli e Enterococcus faecalis com múltiplas resistências, isolados em fezes e mucosa oral de cães e gatos e fezes e mãos dos respetivos proprietários, evidenciando-se assim uma possível transferência direta entre coabitantes (agregados A, C, D, E). Ficou também comprovado com percentagens de similaridade genotípica superiores a 94% que essa disseminação também ocorre para o ambiente doméstico, envolvendo objetos dos animais e de uso comum (agregados A, E). Os resultados obtidos reforçam a necessidade de um uso prudente dos antimicrobianos, pois elevados padrões de resistências terão um impacto não só na qualidade de vida dos animais mas também na saúde humana. Adicionalmente importa sensibilizar os proprietários para a necessidade de uma maior vigilância relativamente às formas de interação com os animais, bem como para a adoção de medidas higiénicas cautelares após essa mesma interação.
- Effect of competitive exclusion in rabbits using an autochthonous probioticPublication . Cunha, Sara; Mendes, Ângelo; Rego, Dinis; Meireles, Diana; Fernandes, Ruben; Carvalho, André; Costa, Paulo Martins da; Fernandes, RúbenAnimal nutrition has been severely challenged by the ban on antimicrobials as growth promoters. This has fostered the study of alternative methods to avoid colonisation by pathogenic bacteria as well as to improve the growth of animals and feed conversion efficiency. These new options should not alter the normal intestinal microbiota, or affect it as little as possible. The use of probiotics, which are live microorganisms that beneficially affect the host by improving its intestinal microbial balance, can be seen as a promising way to achieve that goal. In this study, New Zealand White rabbits were fed diets containing an autochthonous probiotic of Enterococcus spp., with the strains EaI, EfaI and EfaD, and Escherichia coli, with the strains ECI 1, ECI 2 and ECD, during a 25-d trial, to evaluate the impact of the probiotic on the faecal microbiota, including population dynamics and antimicrobial resistance profiles. A control group of rabbits, which was fed a diet containing a commonly used mixture of antimicrobials (colistin, oxytetracycline, and valnemulin), was also studied. To assess the colonisation ability of the mentioned probiotic, the faecal microbiota of the rabbits was characterised up to 10 d after the administration had ended. Isolates of enterococci and E. coli were studied for phylogenetic relationships using enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC-PCR) and pulse-field gel electrophoresis (PFGE), respectively. Although partially affected by an unexpected clinical impairment suffered by the rabbits in the experimental group, our results showed the following. The difference between the growth rate of the animals treated with antimicrobials and those fed the probiotic was not statistically significant (P> 0.05). The competitive exclusion product was present in the faecal samples in a large proportion, but stopped being recovered by culture as soon as the administration ended and the housing conditions were changed. Multidrug-resistant strains of enterococci and E. coli were more commonly recovered from faecal samples of animals fed diets containing antimicrobials, than from rabbits fed diets with our probiotic formula. The use of E. coli probiotics to prevent infection by enteropathogenic strains must be carefully considered due to the possible occurrence of gastrointestinal signs. On the other hand, enterococci strains may be more effective, but lack the long-term colonisation ability.
- Impacto da temperatura na incerteza da medição de massa volúmica por dois métodosPublication . Meireles, Diana; Vilão, G.; Ramos, C.A.Dada a importância da determinação da incerteza nos processos clínicos e laboratoriais, como por exemplo, a determinação da massa volúmica de fluidos com nanopartículas, usados para diagnósticos e terapias na área da saúde, é relevante saber qual dos métodos mais se adequa para estes processos. No presente trabalho utilizamos dois métodos para medir a massa volúmica: um densímetro digital que usa o princípio de oscilação do tubo em U e o método do picnómetro, baseado na medição precisa de massa e volume. O estudo comparou a eficiência desses métodos em várias temperaturas de trabalho, usando neste caso o etilenoglicol como substância de referência. Os resultados mostraram que a incerteza das medições aumenta com a temperatura de trabalho. Comparativamente, o picnómetro apresentou menores desvios dos valores experimentais com os valores de referência em temperaturas mais baixas, tornando-se a melhor escolha para medir a massa volúmica destes fluidos, sob estas condições. A avaliação das incertezas seguiu rigorosos procedimentos matemáticos, garantindo a confiabilidade dos resultados, garantido assim que o picnómetro pode ser usado para a determinação da massa volúmica de fluidos com nanopartículas em suspensão. O densímetro digital ainda apresentou o limitação do tubo capilar ser muito pequeno e de difícil limpeza dificultando assim medidas de fluidos que tenham nanopartículas incorporadas.