Nouws, Hendrikus Petrus AntoniusVarela, Catarina Moreira Rodrigues2019-09-172022-07-252019http://hdl.handle.net/10400.22/14625A doença renal crónica, cuja incidência tem vindo a aumentar, caracteriza-se pela perda progressiva e irreversível da função dos rins. É uma patologia que nos estádios iniciais é silenciosa e assintomática, pelo que o diagnóstico ocorre, normalmente, em estádios avançados, o que compromete o tratamento e a qualidade de vida do paciente. Apesar de já existirem metodologias de diagnóstico precoce, baseadas na análise de biomarcadores desta doença, estas são demoradas, dispendiosas e requerem equipamentos sofisticados e técnicos qualificados. Assim, espera-se que o desenvolvimento de estratégias analíticas alternativas que simplifiquem a metodologia de análise contribua significativamente para a diagnóstico precoce desta doença. Neste sentido, no presente trabalho propôs-se o desenvolvimento de um imunoensaio eletroquímico para o diagnóstico precoce da doença renal crónica, através da deteção da cistatina C. A estratégia sensora estudada combinou a versatilidade e baixo custo dos elétrodos serigrafados com a elevada seletividade de um imunoensaio de tipo “sanduíche”, no qual se utilizaram partículas magnéticas para a imobilização do anticorpo de captura. A interação entre o anticorpo de deteção e o analito, foi identificada recorrendo a uma marca enzimática (fosfatase alcalina) e à deteção eletroquímica de um dos produtos da reação correspondente. Após a otimização das condições experimentais, a resposta do imunoensaio a concentrações crescentes do analito em estudo demonstrou ser linear entre 5 ng/mL e 25 ng/mL de cistatina C, tendo-se obtido um limite de deteção de 2,1 ng/mL. No âmbito deste trabalho foram, também, analisadas com sucesso amostras reais de pacientes com doença renal crónica, o que comprovou que com a metodologia desenvolvida foi possível detetar este biomarcador nos estádios iniciais da patologia com uma exatidão aceitável. O ensaio desenvolvido forneceu resultados altamente precisos (coeficiente de variação inferior a 10%) num tempo de análise total inferior a 4 horas. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que o imunoensaio proposto poderá, no futuro, contribuir para o diagnóstico precoce e descentralizado da doença renal crónica.Chronic kidney disease, which incidence has been increasing, is characterized by the progressive and irreversible decline of kidney function. It is a pathology that in its early stages does not reveal any symptoms, resulting in diagnosis in advanced stages which compromises the treatment and quality of life of the patient. Although there are already some early diagnosis methodologies based on biomarker analysis, these are time consuming, expensive and require sophisticated equipment and qualified technicians. Like this, it is expected that the development of alternative analytical strategies that simplify the analysis methodology will greatly contribute to an earlier diagnosis of the disease. Therefore, in the present work the development of an electrochemical immunoassay for the diagnosis of chronical kidney disease is proposed through the detection of cystatin C. The used sensing strategy combined the versatility and low cost of screen-printed electrodes with the high selectivity of a “sandwich” type magnetoimmunoassay, using magnetic beads modified with the capture antibody. The interaction between the detection antibody and the analyte was monitored, employing an enzymatic label, through the electrochemical detection of an enzymatic reaction product. After the optimization of the experimental conditions the response of the immunoassay to increasing concentrations of the analyte showed a linear range between 5 ng/mL and 25 ng/mL of cystatin C, with a limit of detection of 2.1 ng/mL. Furthermore, real patient samples with chronic kidney disease were successfully analyzed, which proved that the developed methodology was able to detect this biomarker in the early stages of the disease with an acceptable accuracy. The developed assay provided highly precise results (coefficient of variation below 10%) within 4 hours. According to the obtained results it is expected that the proposed immunoassay could be useful in the early and decentralized diagnosis of chronic kidney disease.porImunoensaio eletroquímicoBiomarcadorCistatina CDoença renal crónicaPartículas magnéticasElétrodos serigrafadosElectrochemical immunoassayCystatin CBiomarkerChronic kidney diseaseMagnetic beadsScreen-printed electrodesmaster thesis202279790