Socodato, RenatoPortugal, Camila C.Ferraz, RicardoDias, Daniela Carina Oliveira2026-02-252026-02-252025-11-27http://hdl.handle.net/10400.22/31897Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease characterized by the extracellular deposition of β -amyloid peptides (Aβ) and the accumulation of hyperphosphorylated tau proteins, leading to cognitive and neuronal dysfunction. The cytoskeleton, a complex and dynamic structure, is crucial for the organization and morphology of microglia, supporting their motility, phagocytosis, and immune surveillance in the CNS. This study employs proteomic and phosphoproteomic approaches to investigate site-specific phosphorylation changes that are representative of structural and functional changes in the microglial cytoskeleton in response to AD. The bioinformatics analysis carried out allowed the identification of critical cellular components such as actin cytoskeleton and microtubule cytoskeleton, both essential for microglia to respond to pathological stimuli. We identified a total of 131 differentially abundant phosphopeptides between WT and 5xFAD. Among them, a key outcome was the hyperphosphorylation of Septin2 at residue S218, which showed an approximately 2.5-fold increase in 5xFAD compared to WT (q-value = 3.5e10-4). Alterations in the dynamics of these cellular components destabilize the organization and behavior of the microglial cytoskeleton, contributing to the progression of pathology in the 5xFAD murine model. Notably, increased levels of Septin phosphorylation, essential regulators of cytoskeletal dynamics, were observed. These findings suggest that dysfunctions in the microglial cytoskeleton create an environment conducive to the initiation of neurodegenerative cascades in Alzheimer's disease.A doença de Alzheimer (AD) é uma doença neurodegenerativa progressiva, caracterizada pela deposição extracelular de peptídeos β-amilóides (Aβ) e pela acumulação de proteínas tau hiperfosforiladas, levando a disfunção cognitiva e neuronal. O citoesqueleto, uma estrutura complexa e dinâmica, é crucial para a organização e morfologia da microglia, suportando a sua motilidade, fagocitose e vigilância imunológica no SNC. Este estudo utiliza abordagens proteómicas e fosfoproteómicas para investigar alterações de fosforilação sítio-específicas que são representativas de alterações estruturais e funcionais no citoesqueleto microglial em resposta à AD. A análise bioinformática realizada permitiu identificar componentes celulares críticos, como o citoesqueleto de actina e o citoesqueleto de microtúbulos, ambos essenciais para que a microglia responda a estímulos patológicos. Identificamos um total de 131 fosfopeptídeos diferencialmente expressos entre WT e 5xFAD. Entre eles, um elemento-chave foi a hiperfosforilação de Septin2 no resíduo S218, que mostrou um aumento de aproximadamente 2,5 vezes no 5xFAD em comparação com o WT (valor q = 3,5e10-4). A alteração na dinâmica destes componentes celulares desestabiliza a organização e o comportamento do citoesqueleto microglial, contribuindo para a progressão da patologia no modelo murino 5xFAD. Notavelmente, foram observados níveis aumentados de fosforilação da septina, reguladores essenciais da dinâmica citoesquelética. Estes resultados sugerem que as disfunções no citoesqueleto microglial criam um ambiente propício ao início de cascatas neurodegenerativas na doença de Alzheimer.engMicrogliaActin cytoskeletonMicrotubule cytoskeletonSeptinsAlzheimer´s diseasemaster thesis204179300